UA Biophysics:Protocols:Elution Buffer ESP
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Buffer Hepes: 400 mOsM, 2 L, pH 7.4
Materiales
- HEPES 9.532 g
- NaCl
- NaOH 1 M 30 ml
- HCl 1 M
Procedimiento
- Colocar 1.8 litros de agua deionizada en la botella con un agitador.
- Diluir el HEPES (concentracion final de 20 mM) y el NaCl (concnetracion final de 170 mM).
- Ajustar pH a 7.4 usando NaOH y/o HCl (Generalmente se inicia con pH de 5.4)
- Determinar la concentración de HCl y NaOH. Por ejemplo, si entre los dos se agregaron 16 ml a 1M, entonces para un buffer de 2 L la concentración es de 8 mM.
- Calcular la osmolaridad y completar los 400 mOsm con NaCl.
- Sacar el agitador y completar los dos litros con agua deionizada
Material | MW (g/mol) | [] mM | mOsM | Cantidad |
---|---|---|---|---|
HEPES | 238.30 | 20 | 20 | 9.532 g |
NaCl | 58.44 | 170 | 340 | 19.869 g |
NaOH | -- | 8 | 8 | 16 ml |
NaCl | 58.44 | 16 | 32 | 1.870 g |